جداسازی و تخلیص پروتیین دخیل در سیستم نوری گونه فانوس ماهی(benthosema pterotum) و کلونینگ، بیان، و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی پروتئین نوترکیب

thesis
abstract

برای اولین بار یک لوسیفراز جدید از گونه benthosema pterotum ،از بندر جاسک در نزدیکی خلیج فارس جمع آوری شد، توسط روش کروماتوگرافی تعویض یونی و با استفاده از رزین q- سفارز تخلیص شد. وزن ملکولی پروتئین با استفاده از روش sds- page در حدود kda 27 و مقدار km برابر با m? 4/0 بود، هر دو این مقادیر مشابه دیگر کولنترازین لوسیفرازها بود. آنزیم bp luciferase بیشینه نشر نور را در دمای co 40، بافر mm tris- hcl ph 9 20 و غلظت mm mg2+ 20 نشان می داد. اندازه گیری های تجربی نشان داد که bp luciferase یک آنزیم نسبتا" پایدار به حرارت بوده و در ph های بحرانی فعالیت باقی مانده بالایی داشت. فعالیت آنزیم به شدت در غلظت mm 1 از یون های cu2+، zn2+ و ni2+ مهار می شد در حالی که کلسیم و به ویژه منیزیم به شدت فعالیت آنزیم را افزایش می دادند. همانند سایر کولنترازین لوسیفرازها، آنزیم bp luciferase نور آبی از خود نشر می کرد، ?max محاسبه شده برای آنزیم nm 475 بود. دیگر پارامترهای اندازه گیری شده برای این آنزیم متفاوت از سایر کولنترازین لوسیفرازهای شناخته شده بود که تایید می کرد پروتئین جدیدی خالص شده است. در این پژوهش همچنین cdna ژن آنزیم bp luciferase کلون و تعیین سکانس شد. cdna یک قطعه bp 666 بود که توانایی کد کردن پلی پپتیدی با 222 آمینواسید و وزن ملکولی در حدود kda 24 را داشت. ویژگی های لومینسانس پروتئین نوترکیب در مقایسه با آنزیم native کاهش یافته بود. به نظر می رسد پروتئین بیان شده بخشی از زیر واحد کاتالیتیک آنزیم bp luciferase باشد اما به دلیل این که کل ژن این آنزیم کلون نشده، بیان پروتئین کامل نیست. این امر می تواند دلیل فعالیت کمتر پروتئین نوترکیب در مقایسه با پروتئین native استخراج شده از بافت های فوتوژنیک باشد.

similar resources

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25

Background & Objectives:Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking complex in synaptic ends. This protein is subtrate for botulinum neurotoxins types A,C, and E. Each of these toxin serotyp...

full text

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن ta...

full text

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن

Background and purpose: Measurement of thyroid stimulating hormone (TSH), usually through RIA and ELISA tests, is very useful for the diagnosis of thyroid disorders. Considering the structural similarity between alpha chain of TSH and the three glycoprotein hormones of luteinizing hormone, follicle stimulating hormone, and chorionic gonadotropin (CG), in this study, we aimed to examine the prod...

full text

بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ژن سنتتیک زنجیره HC تتانوتوکسین در سیستم بیانی پروکاریوت

زمینه و هدف: توکسین کلستریدیوم تتانی یا تتانواسپاسمین عامل بیماری مهلک کزاز است. امروزه از توکسوئید آن به عنوان واکسن استفاده می شود. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره L، HN و HC می باشد. زنجیره HC بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندیدای واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه، طراحی و تهیه ژن صناعی زنجیره HC تتانواسپاسمین، بیان و بهینه سازی آن و تخلیص پروتئین نوترکیب حاصل از آن به عنو...

full text

جداسازی، کلونینگ و بیان FVII نوترکیب انسانی در سیستم بیانی باکولوویروس

زمینه و هدف: فاکتور VII یکی از عوامل انعقادی مهم در مسیر خارجی انعقاد خون است که می تواند با فعال کردن FX نیاز بیماران هموفیل را به فاکتورهای VIII و IX رفع نماید. بیان نو ترکیب این فاکتور مشکلات موجود در تهیه فاکتور های مذکور از پلاسما (با توجه به میزان اندک آن ها) و همچنین خطر انتقال بیماری های خونی را برطرف می سازد. لذا هدف از این پژوهش بیان فاکتور مذکور به صورت نو ترکیب و در سطح بالا با استف...

full text

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین snap-۲۵

چکیده زمینه و هدف: سم های عصبی کلستریدیوم آزادسازی نوروترانسمیترها را به وسیله ی پروتئولیز اختصاصی و انتخابی snap-25 ، سیناپتوبروین vamp و سینتاکسین، مهار می کنند. پروتئین snap-25 یکی از پروتئین های تشکیل دهنده ی مجموعه ی لنگراندازی (docking complex) در پایانه های عصبی است. این پروتئین سوبسترای سم عصبی بوتولینوم، سروتیپ های a ،c و e می باشد. هر کدام از این سروتیپ ها به طور اختصاصی و در جایگاه و...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرس - دانشکده زیست شناسی

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023